استاندارد کردن pcr تشخیصی به‏ وسیله اینترنال کنترل تکثیری

نویسندگان

الهام مسلمی

دانشگاه آزاد اسلامی- واحد تهران شرق- گروه زیست شناسی- تهران/ایران محمد امین محمودی

موسسه ایرانیان ژن فناور(igf) - تهران/ایران مریم قهری

موسسه ایرانیان ژن فناور(igf) - تهران/ایران محمد حسن شاه حسینی

چکیده

مقدمه: بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاه‏ها به علت استاندارد نبودن، از معایب روش‏‏‏‏های تکثیر مولکولی است. در بیشتر مقالات چاپ شده در زمینه تشخیص pcr عوامل عفونی، ‏اینترنال کنترل تکثیری (ic) وجود ندارد. هدف از پژوهش حاضر، طراحی و توسعه یک روش ساده و سریع، برای‏‏‏‏‏‏ ساخت اینترنال کنترل آزمون‏‏ pcr ‏در آزمایشگاه‏های ‏تشخیصی است. ‏ مواد و روش‏‏ها: در پژوهش حاضر، برای ساخت اینترنال کنترل رقابتی، از پرایمرهای مرکب و روش pcr-cloning استفاده شد‏‏. بدین ترتیب که پرایمرهای جلویی و عقبی تشخیص pcr ویروس هپاتیت) ‏(hbv، ویروس هرپس سیمپلکس ‏hsv))، مایکوباکتریوم توبرکلوزیس (mtb)،‏‏ مایکوپلاسما پنومونیه (mpn)،‏‏ کریپتوکوکوس نئوفورمنس ‏(cne)،‏‏ جنس سالمونلا (sal. sp) و جنس مایکوپلاسما (m. sp) را در بخش '5 پرایمرهای ژن کینتوپلاست لیشمانیا، به شکل‏‏ دم طراحی و سنتز شد. اینترنال کنترل‏های تکثیری با پلاسمید ptz57r الحاق و در باکتری اشریشیاکلی jm107 ترانسفورم شد‏‏. تعداد حداقل ic در هر واکنش pcr از طریق رقیق‏سازی ‏‏‏‏و همین‏طور طیف پاسخ pcr همراه با ic بررسی شد‏‏‏‏‏‏‏‏‏. ‏ نتایج: hbv–hsv–mtb–mpn–cne–sal. sp– و m. sp با پرایمر‏های اختصاصی به ترتیب برابر با 272bp-284bp-415bp-345bp-245bp-454bp-262bp و محصول اینترنال کنترل هم به ترتیب 672bp-668bp-661bp-669bp-660bp-662bp-660bp جفت باز بود، که از نظر اندازه، اختلاف مطلوبی بین محصول pcr و ic وجود دارد و به آسانی در ژل قابل تفکیک است. تعداد حداقل ic در هر واکنش، 1000 عدد تعیین شد. حداقل و حداکثر حساسیت آزمون‏‏ pcr همراه با ic برای همه عوامل در حد مطلوبی به دست آمد. در آزمون‏‏ ویژگی با عوامل مختلف هم، هیچ محصول ناخواسته‏ای ‏مشاهده نشد. ‏ بحث و نتیجه‏گیری: نتایج منفی و مثبت کاذب که به علت‏های‏‏‏ مختلف در روش‏‏‏ pcr رخ می‏دهد از مشکلات مهم این روش‏‏‏ جذاب است‏‏‏. استفاده از یک اینترنال کنترل در تشخیص مولکولی به عنوان کنترل داخلی، می‏‏تواند این خطاها را شناسایی کند. ‏

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

استاندارد کردن PCR تشخیصی به‏ وسیله اینترنال کنترل تکثیری

مقدمه: بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاه‏ها به علت استاندارد نبودن، از معایب روش‏‏‏‏های تکثیر مولکولی است. در بیشتر مقالات چاپ شده در زمینه تشخیص PCR عوامل عفونی، ‏اینترنال کنترل تکثیری (IC) وجود ندارد. هدف از پژوهش حاضر، طراحی و توسعه یک روش ساده و سریع، برای‏‏‏‏‏‏ ساخت اینترنال کنترل آزمون‏‏ PCR ‏در آزمایشگاه‏های ‏تشخیصی است. ‏ مواد و روش‏‏ ها: در پژوهش حاضر، برای ساخت اینترنال کنترل رقابتی، از ...

متن کامل

ساخت اینترنال کنترل تشخیص مولکولی ویروس هپاتیت B به روش PCR-Cloning

سابقه و هدف: در تشخیص هپاتیت ناشی از ویروس هپاتیت B (HBV )، بکارگیری تکنیک های آزمایشگاهی حساس و اختصاصی همچون PCR ضروری است. روشهای سرولوژیکی موجود، قابلیت تشخیص سریع و دقیق آلودگی را نداشته درحالیکه روشهای نوین مولکولی مانند PCR ابزار کارآمدی برای ارزیابی میزان شیوع HBV می باشد. بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاهها بدلیل استاندارد نبودن از معایب این تکنیک مولکولی قوی است. یکی از مهم ترین موانع در...

متن کامل

ازدیاد وتکثیر ژن invA سالمونلا به وسیله PCR بعنوان یک روش تشخیصی این باکتریها

هدف: تعیین ژن تهاجم سالمونلاها با روش PCR طرح: مطالعه آزمایشگاهی روش: تعداد 60 نمونه سالمونلای جداشده از منابع مختلف انسانی و دامی ابتدا با آزمایشات بیوشیمیایی‘ مورد تایید قرار گرفتند . و سپس گروه سرمی این نمونه ها به وسیله آنتی سرم های پلی والان ومونو والان تشخیص معین گردید. برای استخراج DNA آنها از روش جوشاندن استفاده گردید. از دو پرایمر اختصاصی S139 و S141 مطابق برنامه خاصی برای تکثیر ژن...

متن کامل

ساخت اینترنال کنترل تشخیص مولکولی ویروس هپاتیت b به روش pcr-cloning

سابقه و هدف: در تشخیص هپاتیت ناشی از ویروس هپاتیت b (hbv )، بکارگیری تکنیک های آزمایشگاهی حساس و اختصاصی همچون pcr ضروری است. روشهای سرولوژیکی موجود، قابلیت تشخیص سریع و دقیق آلودگی را نداشته درحالیکه روشهای نوین مولکولی مانند pcr ابزار کارآمدی برای ارزیابی میزان شیوع hbv می باشد. بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاهها بدلیل استاندارد نبودن از معایب این تکنیک مولکولی قوی است. یکی از مهم ترین موانع در...

متن کامل

ازدیاد وتکثیر ژن inva سالمونلا به وسیله pcr بعنوان یک روش تشخیصی این باکتریها

هدف: تعیین ژن تهاجم سالمونلاها با روش pcr طرح: مطالعه آزمایشگاهی روش: تعداد 60 نمونه سالمونلای جداشده از منابع مختلف انسانی و دامی ابتدا با آزمایشات بیوشیمیایی‘ مورد تایید قرار گرفتند . و سپس گروه سرمی این نمونه ها به وسیله آنتی سرم های پلی والان ومونو والان تشخیص معین گردید. برای استخراج dna آنها از روش جوشاندن استفاده گردید. از دو پرایمر اختصاصی s139 و s141 مطابق برنامه خاصی برای تکثیر ژن ...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
زیست شناسی میکروارگانیسم ها

جلد ۴، شماره ۱۵، صفحات ۵۵-۶۸

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023